紫外可見分光光度計的用途及波長校正分析

　　紫外可見分光光度計分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。紫外可見分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即朗伯-比耳定律。

　　一、用途主要歸納為以下幾點

　　1、鑒定物質。用來測量待測物質對可見光的吸光度并進行定量分析的儀器，稱為可見分光光度計;紫外可見分光光度計用來測量待測物質對可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器。可以測定核酸和蛋白的濃度，也可以測定細菌細胞密度。

　　2、待測物質是標準物及標準圖譜對照進行分析。

　　3、比較z大吸收波長吸收系數的一致性。

　　4、物質的純度檢驗。

　　5、推測化合物的分子結構及構成。

　　6、是判定絡合物的組成及穩定常數的測定。

　　二、紫外可見分光光度計的波長怎樣校正。

　　1．調整

　　（1） 在接通電源前，應對儀器的安全性進行檢查，電源線接線應牢固，接地線通地要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再接通電源。

　　（2） 將靈敏度旋鈕調至“1”檔（放大倍率z小）。調波長調節器至所需波長。

　　（3） 開啟電源開關，指示燈亮，選擇開關置于“T”，調節透光率[100%T]旋鈕使數字顯示[100.0]左右，預熱20min .

　　根據溶液濃度大小，選擇液層厚度合適的吸收池。

　　2．校正

　　（！）打開吸收池暗室蓋（光門自動關閉），調節[0% T]旋鈕，使數字顯示為“00.0”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調節透光率[100% T] 旋鈕，使數學顯示為“100.0”。

　　（2）如果顯示不到“100”，則可適當增加電流放大器靈敏度檔數，但應盡可能使用低檔數，這樣儀器將有更高的穩定性。當改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。

　　（3）按（1）連續幾次調整“00.0”和“100.0”后，如將選擇開關置于“A”，調節吸光度調零旋鈕，使數字顯示為“.000”，即可進行下面吸光度A的測量；如將選擇開關置于“C”，將標準溶液推入光路，調節濃度旋鈕，使得數字顯示值為已知標準溶液濃度數值，即可進行下面濃度c的測量。

　　3．測定

　　（1)吸光度Ａ的測量。將要測Ａ的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測樣品的吸光度值Ａ。

　　（2)濃度c的測量。將要測c試樣溶液推入光路，即可讀出待測樣品的濃度值c。

　　4．結束

　　測量完畢，關閉電源，將各調節旋鈕恢復至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專用盒內。

　　5.注意事項：

　　（1)使用前，使用者應該首先了解本儀器的結構和原理，以及各個旋鈕之功能。

　　（2)儀器接地要良好，否則顯示數字不穩定。

　　（3)如果大幅度改變測試波長時，在調整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應緩慢，需一段光響應平衡時間），當穩定后，重新調整“00.0”和“100”即可工作。

　　（4)儀器左側下角有一只干燥劑筒，應保持其干燥，發現干燥劑變色應立即更新或烘干后再用。

　　（5)當儀器停止工作時，關掉電源，電源開關需同時切斷，并罩好儀器。